Exploiting SUMO Fusion Technology for Enhanced Expression of Nanobodies Targeting Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) in Escherichia coli Exploiting SUMO Fusion Technology for Enhanced Expression of Nanobodies Targeting Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) in Escherichia coli القسم المقالات البحثية

الملخص

في السنوات الأخيرة، ظهرت الأجسام النانوية كأدوات لا تقدر بثمن في مختلف المجالات البحثية والعلاجية بفضل حجمها الصغير، وثباتها القوي، وخصوصيتها العالية. والجدير بالذكر أن عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) يقف كمنظم محوري لتكوين الأوعية، ويلعب دورًا حيويًا محوريًا في السرطان والحالات المرضية الأخرى. وبالتالي، فإن تطوير الأجسام النانوية التي تستهدف VEGF قد حظي باهتمام كبير. ومع ذلك، فإن طرق التعبير التقليدية للأجسام النانوية في الإشريكية القولونية غالبًا ما تواجه تحديات و مشكلات مثل اختلال طي لأجسام النانوية ، وانخفاض الانتاجية، وعدم القابلية للذوبان. واستجابة لهذه العقبات، برزت تقنية SUMO Fusion كاستراتيجية واعدة لتعزيز إنتاج الأجسام النانوية القابلة للذوبان في الإشريكية القولونية. هنا، نقوم بالإبلاغ عن تعبير وتنقية وتوصيف VHH (المجال المتغير للأجسام المضادة ذات السلسلة الثقيلة) في نظام تعبير الإشريكية القولونية باستخدام شريك اندماج صغير متعلق باليوبيكويتين (SUMO). تم استنساخ جين الاندماج
(SUMO-active site TEV-VHH) في ناقل التعبير pET-28(a+) ونقله إلى E. coli  سلالة BL21 codon+ . تم تحسين تعبير VEvhh10 باستخدام 0.5 میلي مولار من الإيزوبروبيل بيتا-دي-ثيوجالاكتوبيرانوزيد (IPTG) لمدة 22 ساعة عند 25 درجة مئوية في محلول التريبتوزوم Luria (LB). وقد لوحظ تعبير البروتين في شكل قابل للذوبان في 15٪ SDS-PAGE. تم جمع المحلول الطافي SUMO-VEvh10 وتنقيته بواسطة تحليل كروماتوجرافي Ni-NTA. تم تقييم النشاط البيولوجي لـ VEvhh10 من خلال فحص ارتباطه بـ VEGF. يشير الارتباط الناجح لـ VEvhh10 إلى VEGF إلى أنه يمكن استخدام هذا البروتين غير المندمج في التطبيقات التشخيصية العلاجية والسريرية المستقبلية.